改良番茄汁瓊脂培養基基礎

改良番茄汁瓊脂培養基基礎

        (Modified Tomato Juice Agar Base)

用    途：

用于乳酸菌飲料中乳酸菌的菌落計數(GB/T16347-1996，GB/T4789.35-2003和SN/T1941.1-2007)。

原    理：

          番茄汁可提供碳源、蛋白質等營養物質；牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、維生素和生長因子；葡萄糖和乳糖為可發酵糖類提供碳源；磷酸氫二鉀為緩沖劑；吐溫-80和乙酸鈉為培養各種乳酸菌提供生長因子，其成分還能抑制某些雜菌；瓊脂是培養基的凝固劑。

配方（每升）：

*終pH 6.8±0.2

使用方法：

1、切碎洗凈的新鮮番茄，放入三角瓶，置4℃冰箱8—12h，取出后用紗布過濾。稱取本品60g，加入950 ml蒸餾水或去離子水和50ml番茄汁，攪拌加熱煮沸至完全溶解，校正pH后分裝三角瓶，121℃高壓**15min。

2、無菌操作將經過充分搖勻的檢樣25g（或25mL），放入含有225mL**生理鹽水的**廣口瓶內，振搖均勻，即為1：10稀釋液，依次做1：100、1：1000……稀釋。

3、選擇2—3個合適的稀釋度，分別在做10倍遞增稀釋的同時，吸取1mL稀釋液于**平皿中，每個稀釋度做2個平皿。

1、 將培養基涼至50℃左右，將培養基注入平皿中約15mL，待瓊脂凝固后，翻轉平板，置于36±1℃溫箱中培養72±3h。

2、 選擇菌落數在30—300個之間的平皿進行計數。計算后，隨機挑取5個菌落數進行革蘭氏染色，顯微鏡檢查并做過氧化氫酶試驗。革蘭氏陽性，過氧化氫酶陰性，無芽孢的球菌或桿菌可定為乳酸菌。根據證實為乳酸菌落計算出該皿內的乳酸數，然后乘其稀釋倍數即得每毫升樣品中乳酸菌數。例如，檢樣10-4的稀釋液在改良TJA培養基平板上，生成的可疑菌落為35個，取5個鑒定，證實為乳酸菌的是4個，則1 mL檢樣中乳酸菌數為：

4

               35× — ×104＝2.8×105

                    5

質量控制：

          下列菌株接種后于36±1℃培養72h結果如下：

貯    存：貯存于避光、陰涼干燥處，用后立即旋緊瓶蓋。貯存期三年。

規    格：250g

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